期刊简介
本杂志系中华人民共和国卫生主管，中国输血协会与中国医学科学院输血研究所主办的国内输血医学专业唯一公开发行的国家级学术刊物，中文临床、特种医学类核心期刊，中国生物医学核心期刊。报道有关输血的临床实践、基础研究、献血与健康，以及血液制品的开发与生产等方面的最新成就，多角度地客观反映国内输血医学及输血科学的进展与水平。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
首页>中国输血杂志
- 杂志名称：中国输血杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
- 国际刊号：1004-549X
- 国内刊号：51-1394/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中文临床医学、特种医学类核心期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
用PCR-SSP技术检测弱D型RHD基因1例
徐群；李京；王玫；张世训
关键词：弱D型, 红细胞 RHD基因 聚合酶链反应-序列特异性引物
摘要：RhD抗原(ISBT004.001；RH1)是一种由RhD蛋白携带的非常重要的血型抗原，是引起新生儿溶血病的主要原因［1］。极少数人红细胞的D抗原表达数目减少，被称之为弱D(以前叫作DＵ)，在白种人中的比例为0.2%～1%，在黄种人中的比例则更低。一部分弱D被解释为RhD蛋白的质的变化，称之为部分D，通常是由RHD／RHCE杂化基因引起，另一部分弱D是由Cde单倍体反式位置的抑制作用引起，这些弱D可能有正常的RHD基因，其RhD抗原表达只是微量减少，被宽松地称之为高级DＵ，现在常被定为正常的RhD。近笔者发现1名供血者红细胞为弱D型，且实验结果显示弱D型具有独特的基因结构，现报告如下。1 对象与方法1.1 研究对象献血者，男，21岁，汉族，在校学生，来本中心献血时被确定为弱D；阴阳性对照血样亦均取自本中心献血者，民族为汉族。1.2 序列特异性引物针对RHD和RHCE基因之间具差异的区段设计多对不同引物，特异性地扩增RHD基因的第2～7，9，10外显子和RHCE基因的第1，2，4，5外显子，以及RHD和RHCE基因的第4内含子(表1)。另以人类生长激素(HGH)基因序列特异性引物作为内对照引物，扩增片段为429bp(以上引物均由美国G&T公司合成、纯化及鉴定)。1.3 基因组DNA的制备使用美国G&T公司基因组DNA抽提试剂盒，采用盐析法从供血者外周血分离获得。0.3ml EDTA抗凝外周血加入1 ml红细胞裂解液，离心弃上清，沉淀加入170μl核裂解液及4μl SDS，剧烈振荡，再加入72μl NaCl溶液，10000r/min离心5min，取上清加入210μl异丙醇沉淀DNA，将DNA溶于100μl TE溶液中，保存待用。1.4 特异性PCR扩增反应体系11μl,含1μl DNA,8μl引物混合物，1U Taq酶。扩增条件为95℃预变性5min，95℃变性30s,60℃退火30℃s，72℃延伸90s,30循环。PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳时间为25min。
友情链接