期刊简介
本杂志系中华人民共和国卫生主管，中国输血协会与中国医学科学院输血研究所主办的国内输血医学专业唯一公开发行的国家级学术刊物，中文临床、特种医学类核心期刊，中国生物医学核心期刊。报道有关输血的临床实践、基础研究、献血与健康，以及血液制品的开发与生产等方面的最新成就，多角度地客观反映国内输血医学及输血科学的进展与水平。
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- 杂志名称：中国输血杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
- 国际刊号：1004-549X
- 国内刊号：51-1394/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中文临床医学、特种医学类核心期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
改良TMB比色法替代51Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究
尹建平；余谨；陆华新；陈禹潭；马成；赵云斌
关键词：微量游离Hb, 3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺(TMB), 抗体依赖性细胞细胞毒效应(ADCC)
摘要：目的 建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的3,3',5,5',--四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法.方法 利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化3,3',5,5'--四甲墓联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600mm处的检测体系.采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞.比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照.在 ADCC实验中,分别用s51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率.结果 显色反应结束后加硫酸酸终止测定大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600nm.不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075g/L,显色时间20min,TMB优浓度是0.62g/L,空白吸收始终稳定的维持在＜0.003的较低值.而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5g/L.显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法.在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4h孵育时间以及2.5x106cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14h并且19要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量.用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999).结论 改良TMB比色法可以代替,51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应.加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测.
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