期刊简介
本杂志系中华人民共和国卫生主管，中国输血协会与中国医学科学院输血研究所主办的国内输血医学专业唯一公开发行的国家级学术刊物，中文临床、特种医学类核心期刊，中国生物医学核心期刊。报道有关输血的临床实践、基础研究、献血与健康，以及血液制品的开发与生产等方面的最新成就，多角度地客观反映国内输血医学及输血科学的进展与水平。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
首页>中国输血杂志
- 杂志名称：中国输血杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
- 国际刊号：1004-549X
- 国内刊号：51-1394/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中文临床医学、特种医学类核心期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
His99Arg突变患者血浆凝血因子Ⅷ活性的稳定性研究
游国岭；王学锋；丁秋兰；秦欢欢；许冠群；张利伟；奚晓东；王鸿利
关键词：His99Arg, FⅧ:C, 蛋白稳定性, DNA突变, 血友病A
摘要：目的 探讨His99Arg突变致患者血浆凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性检测结果变化大及一期法和二期法FⅧ活性检测结果不相符的分子发病机制.方法 以凝固法检测先证者及家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),FⅧ活性(FⅧ:C)、FⅨ:C等.基于APTT途径的一期法和基于发色底物法途径的二期法检测FⅧ:C,测定患者血浆分别在37、25、4、-20及-80℃时的FⅧ:C,测定56℃时患者血浆FⅧ:C稳定性(一期法)及FⅧ蛋白的热稳定性(EILSA法)；以长链PCR及序列特异PCR检测F8基因内含子22及内含子1倒位,对F8基因所有外显子及其侧翼序列测序；以PyMOL软件分析FⅧ突变蛋白的三维结构；构建His99Arg突变表达载体,转染HEK293T细胞后博莱霉素筛选稳定表达细胞株,测定培养上清FⅧ:C稳定性.结果 先证者血浆FⅧ:C:一期法检测为14.7％,二期法检测为1.2％.和正常人相比,患者血浆在室温放置＜2h时FⅧ:C迅速下降,＞2h后FⅧ:C基本稳定在1％左右；在4℃孵育时FⅧ:C下降的趋势和室温放置时基本相似；FⅧ:C在37℃随孵育时间延长而明显下降,孵育10 min后FⅧ:C下降了93.9％；不管在-20还是在-80℃,患者血浆放置1个月后,其FⅧ:C基本完全丧失；56℃时患者血浆FⅧ:C的半衰期仅为正常人的1/4(2min/8 min)；在56℃时患者FⅧ稳定性下降明显,重链和轻链解离速度是正常人的3倍(2 min/6 min).F8基因分析发现患者存在昏30716A＞G突变而导致His99Arg氨基酸改变；三维结构模型分析显示His99Arg突变后,Arg99残基与His1957及Ser1959残基间的距离由3.49和3.42A分别变为4.19和2.39A.体外表达研究显示培养上清液中的FⅧ具有与患者血浆FⅧ相似的不稳定表现.结论 His99Arg突变引起FⅧ空间结构发生变化和FⅧ重链和轻链解离速度加快.His99Arg突变后FⅧ:C的稳定性明显下降,造成常规条件下FⅧ:C检测结果变化大及一期法和二期法FⅧ:C检测结果的不相符.
友情链接