期刊简介
本杂志系中华人民共和国卫生主管，中国输血协会与中国医学科学院输血研究所主办的国内输血医学专业唯一公开发行的国家级学术刊物，中文临床、特种医学类核心期刊，中国生物医学核心期刊。报道有关输血的临床实践、基础研究、献血与健康，以及血液制品的开发与生产等方面的最新成就，多角度地客观反映国内输血医学及输血科学的进展与水平。
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- 杂志名称：中国输血杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
- 国际刊号：1004-549X
- 国内刊号：51-1394/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中文临床医学、特种医学类核心期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
人CRIF1基因调控骨髓间充质干细胞细胞周期分布初步研究
邓小军；肖燕妮；叶兴德；相丽欣；冉茜；李忠俊
关键词：CR6交互作用因子1, 慢病毒, 载体, 骨髓间充质干细胞, 细胞周期, 基因表达, 蛋白表达, 白血病细胞
摘要：目的 探讨人CRIF1基因对骨髓间充质干细胞(hBMSCs)细胞周期调控机制.方法 通过构建慢病毒载体改变CRIF1表达水平,合成发夹shRNA模板寡核苷酸链,构建pGreenPuro-sh-CRIF1干扰载体;PCR扩增CRIF1基因CDS全长,链接pMD18-T载体经测序鉴定后,构建pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP过表达载体.载体成功构建后包装慢病毒,并转染hBMSCs,以pLentis-CMV-SFFV-GTP空载体病毒作为对照,定量PCR及Western blot(WB)检测CRIF1基因和蛋白表达,流式细胞仪检测hBMSCs细胞周期分布,并通过免疫荧光观察CPIF1与CDK2细胞共定位.结果 成功构建CRIF1 shRNA及过表达慢病毒载体,测定后病毒滴度达到108 TU/mL.以MOI=10转染hBMSCs,并以0.8μg/mL嘌呤霉素筛选1周后,感染效率可达到＞95％,WB及定量PCR证实,CRIF1基因和蛋白的表达水平,在pGreenPuro-sh-CRIF1载体转染后hBMSCs细胞受到抑制:与对照组比较,mRNA相对表达水平0.42±0.03 vs1.00±0.03(P ＜0.01),蛋白相对表达水平0.13±0.024vs1.00±0.04(P ＜0.01),而pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP载体转染后得到增强:与对照组比较,mRNA相对表达水平5.54±0.53vs1.00±0.03(P ＜0.01),蛋白相对表达水平4.21±0.22vs1.00±0.04(P ＜0.01).同时,CRIF1基因过表达诱导hBMSCs G0/G1期阻滞(与对照组比较,84.99±2.66vs77.28±0.86,P＜0.01),抑制CRIF1基因表达促进其进入细胞周期循环:G0/G1期比例与对照组比较,61.60±3.02 vs 77.28±0.86(P ＜0.01).激光共聚焦显示,CRIF1与CDK2共定位于胞浆与胞核.结论 CRIF1可能通过与CDK2结合,负性调控hBMSCs细胞周期分布.
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