期刊简介
本杂志系中华人民共和国卫生主管，中国输血协会与中国医学科学院输血研究所主办的国内输血医学专业唯一公开发行的国家级学术刊物，中文临床、特种医学类核心期刊，中国生物医学核心期刊。报道有关输血的临床实践、基础研究、献血与健康，以及血液制品的开发与生产等方面的最新成就，多角度地客观反映国内输血医学及输血科学的进展与水平。
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- 杂志名称：中国输血杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
- 国际刊号：1004-549X
- 国内刊号：51-1394/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中文临床医学、特种医学类核心期刊期刊收录：CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
脐血单核细胞体外高效扩增NK细胞方法的研究
汪德海；郭昌龙；周越；高建恩；马旭
关键词：脐血, 单核细胞, 自然杀伤细胞, 体外扩增, 肿瘤细胞, K562, 细胞毒
摘要：目的 建立1种使用脐血单核细胞(UCBMC)制备较高纯度自然杀伤(NK)细胞的体外高效扩增方法,并初步鉴定扩增后的NK细胞杀伤肿瘤细胞(K562)的能力.方法 6人份脐血标本来自北京妇产医院,取20 mL/份、采用密度梯度离心法分离脐血中的UCBMC,提取后的UCBMC以1×106个/mL细胞在4 mL含有白细胞介素(IL)-2、IL-12、IL-15和IL-21的X-VIVO15中培养5d,期间于d2和d3添加等体积含上述细胞因子的新鲜培养基;800 g离心将细胞后转入含1 000 IU/ml IL-2和50 ug/mL L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的X-VIVO15培养基中继续培养至14 d,800 g离心收获细胞.无血清RPMI1640重悬后通过台盼蓝染色法做细胞计数测定细胞的扩增倍数;流式细胞仪检测NK细胞重要表面标志物(CD56和CD16等)及与杀伤功能相关的重要分子[CD158a、CD158b、CD158e/k、CD69、CD314(NKG2D)、CD94、CD335 (NKp46)、CD337 (NKp30)、CD62L、CD226(DNAM-1)、CD57和CD336(NKp44)]的表达情况;胞内染色结合流式细胞仪测定细胞杀伤重要效应分子Peffofin和Granzyme B的表达情况,并以乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测扩增后的细胞对K562细胞的杀伤能力.结果 6份UCBMC培养14 d:活细胞总数从培养前的4×106个扩增至(3.6-5.5)×108个,扩增倍数91-137(116±13.1);CD3-CD56+细胞(NK细胞)占比85.6％-95.5％(90.2±3.4)％;培养得到的NK细胞表面除表达CD56分子外,还表达CD16(91.2±2.6)％、CD158a(71.4±4)％、CD158b(52.1±2.2)％、CD158e/k(50.3±6.9)％、CD69 (95.6±2.8)％、CD314(NKG2D)(94.2± 1.7)％、CD94(94.1±2.1)％、CD335(NKp46)(26.6±4.1)％、CD337 (NKp30)(94.6± 1.5)％、CD62L(12.8±3.4)％、和CD226(DNAM-1)(97.6±1.3)％,以及CD57(4.2±0.9)％和CD336(NKp44)(7.1±1)％.胞内染色结果显示:＞90％扩增产物(细胞)内表达与NK细胞杀伤功能相关的Perforin(86.9±2.7)％和Granzyme B(94.1±2.9)％;体外细胞杀伤试验:扩增的细胞对K562在效靶比为5∶1和10∶1时对靶细胞(K562)具有明显的杀伤作用.结论 成功建立了1种从UCBMC不经纯化直接制备高纯度NK细胞的方法——其培养的细胞中表达了NK细胞重要的功能性分子,对K562细胞具有杀伤能力.
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